en سیتوپلاسم اسیدی سبب کاهش فعالیت کانال پتاسیم استخراج شده از شبکه آندوپلاسمی هپاتوسیت های رت می گردد Cell, Stem Cell and Cancer Cell, Stem Cell and Cancer Experimental research article Experimental research article چکیده: مقدمه- اساساً pH داخل سلولی (pHi) تمام فعالیت های سلول را تنظیم می کند. اما مشخص نیست که کانال پتاسیم شبکه آندوپلاسمی(ER) چگونه به pHi پاسخ می دهد. در این مطالعه، اثر مستقیم pHi بر کانال پتاسیم ER مورد بررسی قرار گرفت. روش ها- در این مطالعه از روش الحاق کانال به داخل غشاء دو لایه لیپیدی استفاده گردید. فسفاتیدیل کولین ( بعنوان لیپید غشایی) از زرده تخم مرغ تازه استخراج گردید. غشاء دو لایه لیپیدی بر روی منفذ μm 150 تشکیل گردید. وزیکول های شبکه آندوپلاسمی کبد پس از هموژنیزه کردن و چند مرحله سانتریفوژ بدست آمد. تمام ثبت ها با فرکانس kHz 1 فیلتر شد و با سرعت kHz 10 نمونه برداری و ذخیره گردید تا بصورت آفلاین توسط نرم افزار PClamp10 آنالیز شود. از وسترن بلات و با استفاده از مارکرهای اختصاصی غشاء پلاسمایی، میتوکندری، دستگاه گلژی و شبکه آندوپلاسمی برای تایید خلوص نمونه استخراج شده استفاده گردید. pH محیط سیس و ترانس توسط pH متر (دقت 001/0 واحد) اندازه گیری شد. آنالیز آماری بر اساس آنالیز تک کانال عاری از نویز Markov انجام گردید. یافته ها- آنتی بادی های مختلف استفاده شده بر علیه نمونه استخراج شده بروش وسترن بلات نشان داد که نمونه های ER خالص بوده و حاوی پروتئین از دیگر ارگانل های سلول نیست. ثبت از کانال حضور یک کانال پتاسیم با کنداکتانس pS596 را نشان داد که توسط mM 5/2 ATP ، گلی بن کلامید µM 100 و تولبوتامید µM 400 مهار گردید. افزایش pHi به 2/8 اثری بر فعالیت کانال نداشت. کاهش pHi به 7/6 باعث کاهش فعالیت کانال و مهار کامل فعالیت کانال در pHi 2/6 بدست آمد. نتیجه گیری- نتایج ما نشان می دهد که اسیدی شدن داخل سلول فعالیت کانال پتاسیم ER را مهار می کند. احتمالاً تنظیم مستقیم فعالیت کانال پتاسیم ER توسط pHiاهمیت زیادی جهت درک ما در فرایند هومئوستاز ER دارد. Introduction: Intracellular pH (pHi) regulates essentially all aspects of cellular activities. However, it is unknown how endoplasmic reticulum (ER) potassium channels sense pHi. In this study, we investigate the direct effects of pHi on ER potassium channels. Methods: We used channel incorporation into the bilayer lipid membrane method. L-α-phosphatidylcholine, a membrane lipid, was extracted from fresh egg yolk. Bilayer lipid membrane was formed in a 150 μm diameter hole. Rough endoplasmic reticulum vesicles were obtained from the liver after homogenization and several centrifugations. All single channel recordings were filtered at 1 kHz and stored at a sampling rate of 10 kHz for offline analysis by PClamp10. The purity of cell fractions was confirmed by western blot using specific markers of mitochondria, plasma membrane, endoplasmic reticulum, and Golgi. The pH was measured with a pH meter (0.001 unit accuracy). Statistical analysis was performed based on Markov noise free single channel analysis. Results: Western blotting and antibodies directed against various cellular proteins revealed that ER fractions did not contain specific proteins of the other subcellular compartments. Single channel recordings revealed a 596 pS K+ channel, which was inhibited by 2.5 mM ATP, 100 μM glibenclamide and 400 μM tolbutamide. No effect of increasing pHi to 8.2 was found but decreasing pHi to below about 6.7 produced a marked inhibition of channel activity, with complete block being observed at pHi 6.2. Conclusion: Our results indicate that intracellular acidification inhibits ER K+ channel activities. The direct regulation of ER K+ channels by pHi has important implications for ER homeostasis. cytoplasmic pH, KATP channel, bilayer lipid membrane, endoplasmic reticulum, hepatocyte Cytoplasmic pH, KATP channel, bilayer lipid membrane, endoplasmic reticulum, hepatocyte 292 303 http://ppj.phypha.ir/browse.php?a_code=A-10-769-1&slc_lang=en&sid=1 Naser Khodaee ناصر خدایی naskod45@yahoo.com 3200319475328460014475 3200319475328460014475 No Dept. of Physiology, Medical School, Shahid Beheshti University of Medical Sciences, Tehran, Iran Maedeh Ghasemi مائده قاسمی ghasemi.m.ph@gmail 3200319475328460014476 3200319475328460014476 No Dept. of Physiology, Medical School, Shahid Beheshti University of Medical Sciences, Tehran, Iran Fahanik-Babaei Javad جواد فحانیک بابایی 3200319475328460014477 3200319475328460014477 No Dept. of Physiology, Medical School, Shahid Beheshti University of Medical Sciences, Tehran, Iran Reza Saghiri رضا صغیری saghiri@pasture.ac.ir 3200319475328460014478 3200319475328460014478 No Dept. of Biochemistry, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran Afsaneh Eliasi افسانه الیاسی af.eliassi@sbmu.ac.ir 3200319475328460014479 3200319475328460014479 Yes Dept. of Biochemistry, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran