fa تخلیص و ارزیابی HBeAg نوترکیب به همراه بر چسب هیستیدینی با ساختار فیزیولوژیک طبیعی، به دنبال کلونینگ و بیان آن در E.coli Nervous system (others) Others Experimental research article Experimental research article <div style="text-align: justify direction: rtl"> آلودگی به ویروس هپاتیت (HBV) B یکی از مسایل بهداشت جهانی است به طوری که در حال حاضر حدود 360 میلیون نفر در ایران به این ویروس آلوده اند. در میان آنتی ژنهای این ویروس، عملکرد فیزیولوژیک HBeAg مثبت حضور این آنتی ژن بعنوان مارکر تکثیر ویروس در نظر گرفته می شود و احتمالا در پاتوژنز و پایداری بیماری نقش دارد در حالیکه در بیماران HBeAg منفی، تفاوت قابل ملاحظه ای در سیر بالینی بیماری مشاهده نشده است. در حال حاضر دسترسی به مقادیر زیاد این آنتی ژن جهت کاربردهای تحقیقی و تشخیصی با استفاده از بیان این آنتی ژن بصورت نوترکیب در سیستمهای بیانی مختلف، مسیر گشته است. در تحقیق حاضر با هدف تولید HBeAg نوترکیب به همراه برچسب هیستیدینی، بخشی از ژن HBeAg که دقیقا مطابق با توالی کد کننده آنتی ژن موجود در خون بیماران مبتلا بود، جداسازی و در وکتور pQE-30 کلون گردید. این وکتور برچسب6x His را به انتهای آمینی پروتئین مورد نظر متصل می کند. وکتور نوترکیب حاصل جهت تایید صحت ساختار، تحت برش با آنزیمهای محدود کننده قرار گرفت و سپس به سلولهای E.coli M15 ترانسفورم گردیده و جهت بیان پروتیین، القای شیمیایی با IPTG انجام شد. پس از انجام عمل تلخیص، نتایج SDS-PAGE، ELISA و وسترن بلاتینگ نشان داد که HBeAg نوترکیب به دست آمده، خواص کامل آنتی ژنتیک HBeAg که بطور فیزیولوژیک در خون بیماران مشاهده می شود را داراست و افزوده شدن اپی توپهای His-tag نه تنها اثری بر روی این خصوصیات نداشته است بلکه کاربرد این برچسب امکان استفاده از کروماتوگرافی جذبی با Ni-NTAو تخلیص آسان و یک مرحله ای پروتیین را فراهم می کند. این پژوهش یک ساده و کارامد را برای تهیه HBeAg نوترکیب به میزان زیاد و خلوص بالا برای کاربرد های تشخیصی و تحقیقی در باب فیزیولوژی و پاتوژنز این آنتی ژن معرفی می کند. </div> HBeAg نوترکیب، برچسب هیستیدینی، خصوصیات فیزیولوژیک HBeAg، کروماتوگرافی جذبی pQE30 ،Ni-NTA 125 136 http://ppj.phypha.ir/browse.php?a_code=A-10-2-84&slc_lang=fa&sid=1 آرش آرش کیا 32003194753284600696 32003194753284600696 Yes فرزین روحوند 32003194753284600697 32003194753284600697 No سیدمهدی سادات 32003194753284600698 32003194753284600698 No صفیه امینی 32003194753284600699 32003194753284600699 No سعید عندلیبی 32003194753284600700 32003194753284600700 No مهدی فروزنده 32003194753284600701 32003194753284600701 No